Cutbert等發(fā)現(xiàn)缺乏內源性和外源性膽固醇時，培養(yǎng)于僅含微量LDL營養(yǎng)液中的人外圍血淋巴細胞,，其生長和增生均依賴與細胞膜表面LDL-R的存在,，根據(jù)這一原理建立了3H-TdR(3H-thymidine,3H-胸腺嘧啶)摻入法檢測人淋巴細胞LDL-R的活性。楊建新等改進了本法,，減少用血量,，但是未能避免使用同位素，簡述止法,。

　　檢測原理：細胞分裂增殖所需的大量膽固醇主要通過內源性膽固醇合成,，以及加速細胞膜LDL-R介導的特異性結合，攝取血LDL中的外源性膽固醇而獲得,，當用mevinolin(膽固醇合成的限速酶HMG-CoA還原酶的抑制劑)阻斷細胞內源性膽固醇的合成,，并使細胞外環(huán)境中LDL濃度降低至無非特異性外源膽固醇攝取時，細胞分裂生長完全取決與細胞膜表面LDL-R活性,，摻入3H-TdR量與細胞生長成正比例關系,。

　　實驗方法：采空腹靜脈血5～6ml，肝素抗凝,，測血漿血脂,，并分離出淋巴細胞;將細胞分成實驗組(加含mevinolin的二甲亞礬)和對照組(加不含mevinolin的二甲亞礬)，在同樣條件下(50μg/mlPHA,，5μg/mlLDL-C,，37℃，5%CO2,，飽和濕度)培養(yǎng)96h,，分別加入0.5μCi3H-TdR，混勻后繼續(xù)培養(yǎng)6h,，收集細胞至玻璃纖維紙上測cpm值,。

　　其計算公式為：

　　淋巴細胞分裂抑制率(%)=(1-Δcpm實驗組/Δcpm對照組)×100%

　　采用本法正常淋巴細胞分裂抑制率<20%;fh雜合子淋巴細胞分裂抑制率>60%，故可將FH患者與正常人以及普通的高脂血癥區(qū)別開來,。

　　MTT比色法是孟凡青等根據(jù)3H-TdR摻入法為避免使用同位素而改用四甲基偶氮唑鹽(MTT)建立的一種快速,、方便的方法。MTT比色法僅需采空腹靜脈血1～2ml,，培養(yǎng)90h后,，實驗組和對照組分別加入MTT溶液(3mg/ml)，再培養(yǎng)2h，抽吸上清,，加0.04mol/HCL-異內醇,，充分溶解，在酶標儀上測吸光度(A)值,。詳細操作流程見圖20-2,。

　　圖20-2 MTT比色法檢測LDL-R操作流程

　　細胞分裂抑制率計算公式為：

　　淋巴細胞分裂抑制率(%)=(1-ΔA實驗組/ΔA對照組)×100%

　　正常人淋巴細胞分裂抑制率為0～18%;FH雜合子淋巴細胞分裂抑制率為21%～58%;FH純合子淋巴細胞分裂抑制率為36%～60%。

　　經實驗比較MTT比色法與經典的3H-TdR摻入法測定的結果基本相符,，但是后者敏感性更強,，可以一步將FH雜合子和FH純合子區(qū)分開來。由于MTT比色法不需使用昂貴的儀器和同位素,，用血量少,，適合一般實驗室及臨床檢驗科室的臨床診斷，可用于人群FH篩查,，這對于減少雜合子之間的婚配,，降低FH發(fā)病率有重要意義。