甘油三酯又稱(chēng)中性脂肪，由于其甘油骨架上分別結(jié)合了3分子脂肪酸,、2分子脂肪酸或1分子脂肪酸,，相應(yīng)稱(chēng)為甘油三酯(TG)、甘油二酯(DG)和甘油一酯(MG),。血清中90%～95%是TG,，TG中結(jié)合的脂肪酸分別為油酸(44%)、軟脂酸(26%),、亞油酸(16%)和棕櫚油酸(7%),。

　　血清TG測(cè)定方法一般分為物理化學(xué)法、化學(xué)法及酶法三大類(lèi),。

　　血清中TG的化學(xué)組成并不單一,，準(zhǔn)確求其分子較為困難。因標(biāo)準(zhǔn)不同,，測(cè)定結(jié)果存在差異,。化學(xué)法多采用三棕櫚精(軟脂精)(分子量807.3),、三油精(分子量895.4)為標(biāo)準(zhǔn),，按摩爾濃度計(jì)算。酶法測(cè)定以三油精為標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行換算,。

　　1.化學(xué)法

　　化學(xué)測(cè)定法包括：①TG的抽提分離;②皂化;③甘油糖的氧化;④氧化生成甲掌顯色定量等四個(gè)階段,。操作較為繁雜，影響測(cè)定因素太多,，本法準(zhǔn)確性差,，一般很少用。

　　2.酶法測(cè)定

　　酶法測(cè)定包括：①TG的抽提與皂化;②加水分解生成甘油糖定量等二個(gè)階段,。目前常規(guī)檢測(cè)應(yīng)用的方法有甘油激酶(glycerolkinase,GK)法和甘油氧化酶(glycerol Oxidase,GOD)法,。操作簡(jiǎn)便，快速準(zhǔn)確,，并能在自動(dòng)化生化分析儀上進(jìn)行批量測(cè)定,。

　　一,、乙酰丙酮法

　　1.原理

　　血清中加入異丙醇抽提取甘油三酯，經(jīng)KOH皂化使甘油三酯水解生成甘油及脂肪酸,，甘油在過(guò)碘酸作用下氧化成甲醛,，在氯離子存在下甲醛與乙酰丙酮縮合生成黃色的3，5二乙酰,，1,，4二氫甲基吡啶，其顏色的深淺與甘油三酯的含量成正比,，420nm測(cè)定定量,。該法可用于基本功訓(xùn)練及組織細(xì)胞TG的提取測(cè)定。

　　2.試劑組成

　　代號(hào)種類(lèi)濃度組成貯2-8℃有效時(shí)間

　　R1抽提液　(CH3)CHOH(A.R)重蒸餾

　　R2吸附劑　氧化鋁,，水洗除去微細(xì)顆粒,，

　　110℃烤干3h以上閉封一周

　　R3皂化劑5%KOH 5g+H2O→100ml

　　R4醋酸溶液2mol/LCH3COOH 11.5ml+H2O→100ml

　　R5過(guò)碘酸鈉0.05mol/LNaIO4 1.07g+H2O→100ml

　　R6氧化劑　R4 1體積+R51體積　一周

　　R7醋酸銨液　CH3COONH2 15.4g+H2O→100ml

　　R8顯色劑CH3COCH2COCH30.75ml+R-1

　　40ml+R-7 100ml+R-4 80ml

　　R9參考液2mg/dl三油酸甘油酯

　　2mg+R-1→100ml(TG100mg/dl)

　　3.操作

　　按圖15-3操作。

　　圖15-3 血清甘油三酯(乙酯丙酮法)測(cè)定操作圖

　　4.計(jì)算

　　血清TG濃度=ESA/EST×1.13(mmol/L)

　　二,、酶法(GK-GPO-POD比色法)

　　血清中甘油三酯經(jīng)脂肪酶水解為甘油和脂肪酸,，甘油在甘油激酶(GK)及ATP存在下，生成3-磷酸甘油,，爾后,，在磷酸甘油氧化酶(GPO)作用氧化成磷酸二羥丙酮并生成H2O2，H2O2與底物4-氨基安替比林和ESPAS在過(guò)氧化物酶(POD)作用下,，生成紅色亞醌化合物(quinoneimine),，比色(500nm)，其顏色深淺與甘油三酯含量成正比,。

　　(一)手工測(cè)定法

　　1.試劑組成

　　代號(hào)種類(lèi)濃度貯存2～8℃

　　R1磷酸甘油氧化酶≥3.0KU/L冷藏

　　(A液)抗壞血酸氧化酶≥1.0KU/L

　　甘油激酶≥0.7KU/L

　　4-氨基安替比林80mg/L

　　R2脂蛋白脂酶≥2.0KU/L冷藏

　　過(guò)氧化物酶≥10KU/L

　　ESPAS300mg/L

　　R3(參考液)甘油酸三脂200mg/dl(2.26mmol/L)冷藏

　　*：一般采用商品試劑盒

　　圖15-4 血清甘油三酯測(cè)定法(酶法)操作圖

　　2.操作

　　按圖15-4操作,。

　　3.計(jì)算

　　血清TG濃度=ESA/EST×2.26(mmol/L)

　　(二)生化分析儀檢測(cè)

　　全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定操作(以CL-7200型為例)。

　　1.試劑

　　A液：GK,，GPO,，4-AA-P、抗壞血酸氧化酶等,。

　　B液：POD,，Lipase,ESPAS等。

　　標(biāo)準(zhǔn)液：甘油三油酸酯 200mg/dl(2.26mmol/L),。

　　2.上機(jī)參數(shù)

　　名稱(chēng)參數(shù)

　　方法終點(diǎn)法

　　波長(zhǎng)雙波長(zhǎng)(540nm 700nm)

　　試劑A反應(yīng)時(shí)間2～3min

　　試劑B反應(yīng)時(shí)間5～6min

　　反應(yīng)溫度37℃

　　樣本用量4μl

　　試劑A用量200μl

　　試劑B用量100μl

　　單位mmol/L

　　3.操作過(guò)程

　　4.計(jì)算

　　以△A=A2-A1并根據(jù)同樣之標(biāo)準(zhǔn)或質(zhì)控物計(jì)算,，自動(dòng)打印結(jié)果。

　　5.注意事項(xiàng)

　?、僭噭┡c樣本量可根據(jù)分析儀要求按比例改變,。

　　②試劑在有效期內(nèi)2～8℃避光保存,。

　?、蹣颖局懈视腿ズ砍^(guò)11mmol/L需用生理鹽水稀釋后再測(cè),。