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標(biāo)準(zhǔn)版

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第十五章 血清脂類測(cè)定

《動(dòng)脈粥樣硬化》

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  血漿中的脂類包括膽固醇、膽固醇脂,、甘油三酯,、磷脂和非酯化脂肪酸等。

  目前,,對(duì)有關(guān)脂類代謝疾患的診斷和治療過(guò)程,,均必須檢測(cè)血漿(清)中的脂類,通過(guò)其含量的變化,,對(duì)臨床疾患提供協(xié)助診斷的依據(jù),。有關(guān)醫(yī)學(xué)科研工作,脂類的定量檢測(cè)也是一項(xiàng)必備的研究項(xiàng)目,。

  1.膽固醇測(cè)定

  血漿中膽固醇及其酯的含量檢測(cè),,從方法學(xué)上可分為兩大類:一類是化學(xué)法包括抽提法和直接測(cè)定法,,這類方法目前仍在沿用;另一類是酶法測(cè)定,方法敏感特異快速,,并能自動(dòng)化分析,,已常規(guī)應(yīng)用?;瘜W(xué)測(cè)定法種類多,由于顯色反應(yīng)的特異性不同,,其結(jié)果有一定的差異,。目前公認(rèn)的參考方法是Abell-Kendall(L-B反應(yīng))法。另外,,三氯化鐵-硫酸反應(yīng)法(Zak法)具有顯色穩(wěn)定法,、操作簡(jiǎn)便、靈敏度約5倍于L-B反應(yīng)法,,膽固醇酯與游離膽固醇顯色程度比較接近等優(yōu)點(diǎn),,缺點(diǎn)是特異性差,干擾因素比L-B法多,,如冰醋酸中含有的乙醛酸,,血清樣品中的血紅蛋白,膽紅素以及硫酸的質(zhì)量等因素均可影響Zak方法的準(zhǔn)確性,,Zak法更適合于科研使用,。酶法測(cè)定血清膽固醇的方法已被廣泛采用,國(guó)產(chǎn)試劑已能滿足臨床的需要,。膽固醇測(cè)定用的標(biāo)準(zhǔn)品,,按美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)局(NBS)出品純度達(dá)99.8%,是國(guó)際公認(rèn)的參考物,國(guó)內(nèi)李健齋等已純化制成符合這一要求的膽固醇純品,,已供臨床檢測(cè)血清膽固醇使用,。

  2.甘油三酯測(cè)定

  血漿甘油三酯的測(cè)定,目前多以化學(xué)法和酶法定量,?;瘜W(xué)法測(cè)定甘油三酯是以脂蛋白變性,水解成甘油,,并以甘油為計(jì)算依據(jù),。酶法是以特異酶水解甘油三酯,除去脂肪酸,,再測(cè)定甘油,,方法特異,準(zhǔn)確而快速,,臨床廣為應(yīng)用,。目前甘油三酯測(cè)定的方法主要以定量甘油為依據(jù),,然而血清樣品中存在有游離甘油,如何從反應(yīng)過(guò)程中的總甘油中減去游離甘油,,多年來(lái)一直在研究討論這一問(wèn)題,。若不減去,其測(cè)定值將會(huì)高于血清樣品中的真值,,如果要減去,,就必須先測(cè)出血清樣品中的游離甘油,甘油三酯的測(cè)定方法將增加一個(gè)繁雜的步驟,,實(shí)際工作中難以做到,。有報(bào)道血清樣品中的游離甘油實(shí)際量是0.07~0.13mmol/L,相當(dāng)于甘油三酯的0.5~6.0mmol/L,,為此建議,,實(shí)測(cè)的甘油三酯量減去一個(gè)校正系數(shù)即:

  甘油三酯(mmol/L)=[0.98×總甘油(mmol/L)]-0.07(mmol/L)。

  這一校正系數(shù)也僅適用于健康人,,對(duì)臨床病人并不一定適用,。據(jù)報(bào)道,血清樣品的游離甘油一直是個(gè)未知數(shù),,無(wú)法測(cè)準(zhǔn),。為此,目前臨床測(cè)定血清甘油三酯時(shí),,基本上未考慮游離甘油,,因?yàn)槠浜亢苌伲瑫呵液雎圆挥?。甘油三酯測(cè)定的參考物,,推薦三油酸甘油酯和三軟脂酸甘油酯混合物(2:1,W/W),,此參考物適用于化學(xué)法,。在酶法測(cè)定中,仍以高純度的三油酸甘油酯為參考物,。

  3.磷脂測(cè)定

  血清磷脂包括卵磷脂,、溶血卵磷脂、神經(jīng)磷脂,、腦磷脂和其他少量磷脂,。如需要分別檢測(cè)各種磷脂,可以通過(guò)薄層層析法,、柱層析法和高壓液相色譜法,。目前,臨床僅測(cè)定血清磷脂總量。血清磷脂總量的測(cè)定方法有化學(xué)方法和酶法兩大類,?;瘜W(xué)法是以磷脂中的磷為定量依據(jù),因?yàn)槊苛字肿又卸己幸粋€(gè)磷酸根,,故將磷脂的磷稱為脂性磷,。由于血清中磷脂大部分為卵磷脂,其分子量中磷約占4%,,故將脂性磷換算成磷脂的系數(shù),,一般為25。由于化學(xué)法均需要抽提,,再測(cè)抽提液中的磷脂的磷,,血清中的磷酸鹽不可能混入抽提液中,因此血清中的磷酸鹽對(duì)磷脂測(cè)定的干擾很少,。酶法是利用磷脂酶進(jìn)行定量測(cè)定。生物體中磷脂酶包括磷脂酶A1,、A2,、C和D四種。磷脂酶D特異性差,,均可水解卵磷脂,、溶血卵磷脂和神經(jīng)磷脂,三者約占血清總磷脂的95%,,臨床多用含磷脂酶d 的試劑進(jìn)行磷脂的定量測(cè)定,。

  4.游離脂肪酸測(cè)定

  游離脂肪酸屬于未酯化的一類脂肪酸,故又稱為非酯化脂肪酸,,其量很少,,采用方法必須是靈敏的方法,還需要避免脂肪水解產(chǎn)生脂肪酸的干擾,。測(cè)定方法有:①滴定法需要微量滴定裝置,,因?yàn)橐ㄟ^(guò)肉眼觀察顏色,難免會(huì)有主觀因素的影響,,所以難以測(cè)定準(zhǔn)確,,很難用于常規(guī);②光度法,以銅皂法常用;③酶法,,主要采用特異性不強(qiáng)的脂肪酶D進(jìn)行檢測(cè),,方法特異,快速準(zhǔn)確,,已常規(guī)應(yīng)用于臨床,。

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