免疫化學(xué)方法是利用抗原與其相應(yīng)抗體具有特異結(jié)合的特性,，用熒光素、酶,、發(fā)光素,、同位素、膠體金標(biāo)記某種抗原的抗體,，借助熒光顯微鏡,、電鏡、圖像分析儀、同位素監(jiān)測儀,、分光亮度儀便可對組織中的抗原進(jìn)行定性或定量,，可用于膠原、蛋白多糖,、彈性蛋白、粘連蛋白,、血漿成分的定位和定量分析,。

　　1.抗原提取及單克隆抗體的制備(從略)。

　　2.抗體的標(biāo)記：基本原理是將抗體與標(biāo)記物以共價鍵結(jié)合,。

　　3.組織取材,。

　　因?yàn)榭乖M織容易降解和擴(kuò)散，取材要及時和低溫操作,，取動脈壁冰凍切成4～8μm,，貼于玻片上立即干燥，用95%乙醇固定15min,，然后用0.5mol/l pH7.4 BPS洗1次,。

　　4.抗體染色

　　抗體染色是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，37℃30～60min,，間接法結(jié)合第二抗體,，37℃ 30～60min。每步間隔都用PBS pH7.4洗滌5～10min共洗3次,?？贵w染色方法有直接法、間接法,、補(bǔ)體法：

　　(1)直接法：標(biāo)記抗體直接于組織中進(jìn)行抗原結(jié)合反應(yīng),，用于鑒定未知抗原。

　　優(yōu)點(diǎn)：①結(jié)果判定簡單;②特異性強(qiáng),，因反應(yīng)過程中只有兩個因素,，與抗原交叉反應(yīng)較少。

　　缺點(diǎn)：①不能鑒定未知抗原;②一種標(biāo)記抗體只能檢測一種抗原;③敏感性差,。

　　(2)用已知未標(biāo)記抗體與未知抗原相互結(jié)合或用未知抗體與已知抗原相互結(jié)合,，一定時間后洗掉未結(jié)合成分，加第二標(biāo)記的抗體,。若第一步反應(yīng)中有Ag-Ab的特異結(jié)合,，才會有第二步后續(xù)反應(yīng)。

　　優(yōu)點(diǎn)：①既能檢查Ag又能檢查Ab;②標(biāo)記一種抗體,，就能與一種以上的相應(yīng)抗原結(jié)合鑒定多種抗原或抗體;③敏感性比直接法高,。

　　缺點(diǎn)：①參加反應(yīng)因素多，易出現(xiàn)非特異性反應(yīng);②實(shí)驗(yàn)方法復(fù)雜。

　　(3)補(bǔ)體結(jié)合法：是標(biāo)記補(bǔ)體抗體的方法,，第一步是將抗體和補(bǔ)體加入反應(yīng)體系;第二步是加入標(biāo)記補(bǔ)體抗體,，若第一步有Ag-Ab反應(yīng)，補(bǔ)體抗體則可結(jié)合于補(bǔ)體上,。

　　5.染色定性定量分析

　　熒光素標(biāo)記抗體可用熒光顯微鏡作定性分析,。用顯微熒光分光光度計可定量。酶標(biāo)抗體可用普通顯微鏡定性,，也可定量,。放射性同位素和發(fā)光素標(biāo)記可用同位素檢測儀和發(fā)光計作定性、定量分析,。

　　(孫續(xù)國)