在人類進(jìn)化過程中,，基因的DNA序列在逐漸演變,。這種演變大都發(fā)生在氨基酸編碼子以外的區(qū)域，稱為“中性”變化,，不導(dǎo)致臨床疾病的發(fā)生,。但是,，基因的氨基酸編碼區(qū)以及基因表達(dá)的調(diào)控區(qū)的DNA序列改變時(shí)有發(fā)生,。導(dǎo)致蛋白質(zhì)的合成量改變或基功能的異常,。載脂蛋白結(jié)構(gòu)基因或其調(diào)控區(qū)DNA序列的突變引起致高脂血癥或早發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化已大量見諸于醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)。新的載脂蛋白基因的多態(tài)性不斷地被發(fā)現(xiàn),。

　　檢測載脂蛋白基因的遺傳變異通常使用從外周血白細(xì)胞中提取的DNA為起始材料,，通過聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增基因DNA的產(chǎn)量，嗣后,，或采用變性梯度凝膠電泳(denaturing gradientgel electrophoresis, DGGE)顯示由基因編碼胺基酸區(qū)DAN序列突變所致的單股DNA構(gòu)象的多態(tài)性;或使用等位基因特異的寡核苷酸探針雜交法(allele-specificoligonuc leotide hybridization,，ASO)探測突變的等位基因;或測定限制性片段長度多態(tài)性(restriction fragment length polymorphism, RFLP)鑒定基因DNA序列的突變;或直接對(duì)某基因的片段進(jìn)行DNA序列測定，與正常的相應(yīng)的DNA序列比較,，檢測有否突變發(fā)生,。這幾種方法為較常使用的方法。有關(guān)這些方法的詳細(xì)介紹可參見本書第十六章的生物化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)篇,。本節(jié)主要介紹ApoB,，ApoE,Apo(a)。ApoAⅠ基因的多態(tài)性,。對(duì)其他載脂蛋白基因的多態(tài)性僅以舉例的方式略述,。

　　一、ApoB基因的遺傳變異與多態(tài)性

　　ApoB基因的遺傳變異與多態(tài)性分以下幾種類型進(jìn)行介紹：①RFLP;②導(dǎo)致血漿膽固醇水平降低的基因突變;③導(dǎo)致血漿膽固醇升高的基因突變;④其他類型的多態(tài)性,。

　　1.RFLP

　　據(jù)報(bào)道,，載脂蛋白B基因的限制性片段長度多態(tài)性至少375種。后來發(fā)現(xiàn)有些多態(tài)性并非存在,，純屬DNA序列測定錯(cuò)誤,。表4-3列舉了10種RFLP。產(chǎn)生這些RFLP的突變或發(fā)生在ApoB基因上游啟動(dòng)子區(qū)域,，或發(fā)生在內(nèi)含子區(qū)域,，或在外顯子區(qū)域。

　　表4-3 ApoB基因限制性片段長度多態(tài)性舉例

　　惹限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)突變等位基因出現(xiàn)頻率酶切部位存在或缺失

　　AvaⅡ距第1外顯子上游4Kb0.20缺失

　　MspⅠ啟動(dòng)子區(qū)內(nèi),，-265bp0.21缺失

　　ApaLⅠ第4外顯子,，cDNA的417bp0.36缺失

　　HincⅡ第4內(nèi)含子內(nèi)，距第3外顯子3'末端3334bp0.12存在

　　PvuⅡ第4內(nèi)含子內(nèi),，距5外顯子5'末端4523bp0.08存在

　　AluⅠ第14外顯子內(nèi),，cDNA的1981bp0.48缺失

　　BalⅠ第20內(nèi)含子內(nèi)，距第21外顯子5'末端146bp0.50

　　XbaⅠ第26外顯子內(nèi),，cDNA的7674bp0.40-0.50存在

　　MspⅠ第26外顯子內(nèi),，cDNA的11040bp0.12缺失

　　EcoRⅠ第26外顯子內(nèi)，cDNA的12670bp0.20缺失

　　(源自：Young S G. Circulation 82:1583,1990)

　　表4-3所列發(fā)生在外顯子內(nèi)的突變,，除XbaⅠ限制性片段長度多態(tài)性外,，其余均導(dǎo)致氨基酸改變。已有很多研究者致力于研究常見的ApoB基因PFLP與高膽醇血癥,、高甘油三酯血癥硬化的相關(guān)關(guān)系,，但發(fā)現(xiàn)令人信服的相關(guān)關(guān)系的報(bào)道不是很多,，還有的結(jié)果相互矛盾。正如Young指出的那樣,，有的研究所使用的樣本量太小;有的研究對(duì)照組的選擇不合規(guī)范;有的研究基于不同的種族,，忽視了正常的種族差異。很顯然,。在以后的相關(guān)研究中,，盡可能選用大樣本量，合理的選擇對(duì)照組,，考慮不同種族的正常遺傳變異無疑對(duì)確證某些ApoE基因的RFLP與脂蛋白代謝紊亂的特殊表型以及早發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)聯(lián)尤為重要,。

　　2.導(dǎo)致血漿膽固醇水平降低的ApoB基因突變

　　經(jīng)過許多實(shí)驗(yàn)室的努力，一些ApoB基因的無義突變或移碼突變導(dǎo)致家族性密度脂蛋白血癥均已鑒定(見表4-4),。

　　表4-4 ApoB基因突變導(dǎo)致短ApoB的合成

　　ApoB的長度DNA水平上的突變短ApoB在血漿脂蛋白中的分布

　　B-2在第5內(nèi)含因子中,，G顛換成T無

　　B-9T替代C，使翻譯在411號(hào)密碼子后終止無

　　B-25在第21外顯子內(nèi)有694bp缺失無

　　B-27.6在第24內(nèi)含子內(nèi),，剪接部位突變HDL,，LDL

　　B-29在第4152核苷酸上，T替代C無

　　B-31cDNA核苷酸4480缺失HDL及密度大于1.2g/cm3部分

　　B-32在密碼子1450上,，T替代CHDL,，LDL

　　B-32.5在4631核苷酸上，G替代THDL及密度大于1.21g/cm3部分

　　B-37cDNA核苷酸5391至5394段缺失VLDL,，LDL,，HDL

　　B-39cDNA核苷酸5591缺失VLDL，LDL

　　B-40cDNA核苷酸5693至5694段缺失VLDL,，LDL,，HDL

　　B-46在cDNA核苷酸6381上，T替代CVLDL,，LDL,，HDL

　　B-49.6在cDNA核苷酸6963上，T替代CVLDL,，LDL,，HDL

　　B-52.8cDNA核苷酸7295缺失VLDL，HDL

　　B-54.8cDNA核甘酸7539缺失在cDNA核苷酸7655上,，T替代CVLDL,，HDL

　　B-61在核苷酸8525處，有37bp缺失VLDL,，HDL

　　B-67cDNA核苷酸9327缺失LDL,，VLDL

　　B-74.7cDNA核苷酸10366缺失LDL，VLDL

　　B-82在核苷酸11411上，A替代CVLDL,，HDL

　　B-86cDNA核苷酸11840缺失VLDL,，HDL

　　B-87cDNA核苷酸12032缺失VLDL，HDL

　　B-89cDNA核苷酸12309缺失VLDL,，HDL

　　(源自：Kane ,J.P.,and Havel, R.J.In:The metalbolic and molecular bases of inherited disease,edited by Scriver, C.R.et al, Vol Ⅱ,p1868,1995,McGraw –Hill,Inc.,New York,U.S.A)

　　家族性低低密度脂蛋白血癥的患者大多為雜合子，即他們攜帶一個(gè)正常的ApoB等位基因和一個(gè)變異的ApoB等位基因,。純合子以及復(fù)合雜合子患者少見,。短ApoB合成的患者血漿中ApoB的濃度較低，僅為正常人ApoB等位基因產(chǎn)生的ApoB-100濃度的2%～10%,，其機(jī)理尚未完全明了,。有人發(fā)現(xiàn)，含有ApoB87和ApoB89的LDL比含ApoB-100的LDL更易于被LDL受體攝取,。亦有人推測在雜合子患者中,，由一個(gè)正常ApoB-100等位基因編碼的ApoB-100與兩個(gè)正常ApoE等位基因編碼的ApoE組成的脂蛋白顆粒比正常的脂蛋白顆粒多含有1倍的ApoE，故前者易于被LDL攝取清除,。這些均有助于解釋一部分短ApoB合成患者體內(nèi)低濃度血漿ApoB及低濃度血漿膽固醇的機(jī)制有等進(jìn)一步努力,。不難想到的是，家族性低低密度脂蛋白血癥患者血漿中LDL膽固醇低,，產(chǎn)生冠心病及動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)性也降低,。已有一些報(bào)道證實(shí)，這些患者不產(chǎn)生動(dòng)脈粥樣硬化且壽命增長,。故有人認(rèn)為,，對(duì)慣常食用高飽和脂肪、高膽固醇飲食的北美人群,，攜帶合成短ApoB的突變基因非但無害,，反而有益于健康。

　　3.導(dǎo)致血漿膽固醇升高的基因突變,。

　　Brown和Goldstein的經(jīng)典研究,，即LDL受體基因的突變，引起LDL清除障礙,，LDL在血漿中蓄積,，導(dǎo)致早發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化，這是家族性高膽固醇血癥的主要病因,。這些患者的血漿總膽固醇濃度高于7.76mmol/L,。然而有相當(dāng)一部分人的血漿膽固醇濃度在6.47～7.76mmol/L之間，與正常人相比為輕中度升高,。長期以來,，人們一直推測ApoB基因遺傳變異可合成有缺損的ApoB蛋白質(zhì)，后者與LDL受體親和力下降,，引起LDL清除障礙,，LDL在血漿中蓄積,。這種推測于1989年得到了證實(shí)。Soria等人發(fā)現(xiàn)了家族性ApoB100缺損,。這些病人在其Apob cDNA第10708個(gè)核苷酸位置上,，G轉(zhuǎn)換成了A，導(dǎo)致ApoB100的等3500個(gè)氨基酸精氨酸變換成了谷氨酰胺,。這一突變使其LDL與LDL受體的結(jié)合力下降,，產(chǎn)生高膽固醇血癥。據(jù)估計(jì),，這種突變在人群中的發(fā)生率與LDL受體的突變率接近,，即1/500。

　　另一家族性ApoB100缺損是由ApoB基因第10800核苷酸位置上的C轉(zhuǎn)換成T所致,。這一突變ApoB內(nèi)第3531個(gè)氨基酸精氨酸變成了半胱胺酸,。8個(gè)患者的平均血漿LDL膽固醇水平在6.78mmol/L，而8個(gè)未患ApoB基因突變的親戚為3.88mmol/L,?；颊週DL對(duì)LDL受體的親和力僅為正常對(duì)照組的39%。由于C至T的轉(zhuǎn)換,，產(chǎn)生一個(gè)新的限制性內(nèi)切酶切割部位(NsiI),這將有助于在大范圍人群內(nèi)檢測這種突變發(fā)生率,。

　　4.其他類型的多態(tài)型

　　距ApoB基因3'末端500個(gè)核苷酸堿基對(duì)區(qū)域，有一DNA片段構(gòu)成可變動(dòng)數(shù)目的半聯(lián)重復(fù)(variable number of tandem repeats. VNTR)已發(fā)現(xiàn)ApoB基因3'末端這種VNTR所致的多態(tài)性與心肌梗塞的發(fā)作有關(guān)聯(lián),。

　　ApoB信號(hào)肽由27個(gè)氨基酸組成,。在高加索種族人群中發(fā)現(xiàn)了兩種多態(tài)性：一種為插入等位基因型，編碼27個(gè)氨基酸;另一種為缺失等位基因型,，編碼24個(gè)氨基酸,。Visvikis 等人發(fā)現(xiàn)缺失等位基因型與高血漿ApoB 水平、LDL膽固醇水平,、LP(a)水平以及總膽固醇水平有關(guān),。最近Kammerer等人在34家共686名美籍墨西哥人中發(fā)現(xiàn)編碼ApoB信號(hào)肽的三種等位基因：SP-24，SP-27,，SP-29,，它們分別編碼24，27與29肽,。攜帶SP-24等位基因的純合子其血漿ApoB與LDL膽固醇的濃度顯著高于SP-27純合子,。SP-29雜合子的ApoB與LDL膽固醇水平比SP-24純合子還高。

　　二,、ApoE基因的多態(tài)性

　　ApoE在膽固醇與甘油三酯代謝中起著重要作用,。在正常人群中，10%以上的個(gè)體間血漿膽固醇水平的著異可歸究于ApoE基因的多態(tài)性。主要的ApoE等位基因有ApoE2,、ApoE3和ApoE4,。ApoE3在人群中的出現(xiàn)率最高，被認(rèn)為較常見的ApoE基因,。ApoE2與Ⅲ型高脂蛋白血癥相關(guān),，而ApoE4在老年性癡呆病(Alzheimer's disease)患者中的出現(xiàn)率較高。這后一發(fā)現(xiàn)開拓了人們的視野,，即ApoE不僅在脂類代謝中至關(guān)重要,，而且在其他的代謝過程中也扮演重要角色。已有報(bào)道,，ApoE參與組織損傷的修復(fù),、免疫調(diào)節(jié)以及調(diào)控細(xì)胞生長與分化,。相信隨著時(shí)間推移,，更多新的ApoE功能及新的ApoE基因多態(tài)性會(huì)被發(fā)現(xiàn)。

　　表4-5列舉了一些已鑒定的ApoE基因的遺傳變異,。表中同時(shí)列出了密碼子及其編碼的氨基酸的改變,、特定ApoE基因變異型首先被鑒定出的那個(gè)民族、出現(xiàn)頻率,、相關(guān)的高脂血癥型以及遺傳方式,。

　　表4-5 ApoE多態(tài)性

　　多態(tài)性名稱1變異密碼　子核苷酸改變氨基酸改變2種族背景分布率3高脂血癥型4遺傳方式

　　常見的ApoE基因型

---所有民族41.9～91.1%-

　　ApoE4112TGC→CGCCys→Arg所有民族6.4%～36.8%N/HC

　　ApoE2158CGC→TGCArg→Cys大部分民族0.0%～14.5%N/FD陷性

　　與FD相關(guān)的多態(tài)型

　　ApoE0第3內(nèi)含子A →G,G缺合成兩種短肽美洲黑人14FD陷性

　　3592bp-60失移碼突變合成60肽德國人3FD陷性

　　ApoE4-費(fèi)城13GAG →AAGGlu →Lys拉丁美洲人7FD陷性

　　145CGT →TGTArg →Cys拉丁美洲人　　陷性

　　ApoE3-Leiden112TGC →CGCCys →Arg荷蘭人>40FD顯性

21bp重復(fù)7個(gè)氨基酸患聯(lián)重復(fù)

　　ApoE1127GGC→GACGly→Asp高加索人>25FD未知

　　158CGC→TGCArg→Cys

　　ApoE2-Christchurch136CGC→AGCArg→Ser未報(bào)道3FD未知

　　ApoE3112TGC→CGCCys→Arg拉丁美洲人6FD顯性

　　142CGC→TGCArg→Cys

　　ApoE3--kochi145CGT→TGTArg→His日本人4FD未知

　　ApoE2145CGT→TGTArg→His未報(bào)道3FD未知

　　ApoE1- Harrisburg146AAG→GAGLys→Glu日本人高加索 人8FD未知

　　ApoE2146AAG→GAGLys→Gln荷蘭人美國人>40FD顯性

　　ApoE3華盛頓210TGG→TAGTrp→終止密碼美國白人3FD陷性

　　ApoE2 Fukuoka224CGG→CAGArg→Gln日本人1FD未知

　　與非FD高脂血癥相關(guān)的多態(tài)型

　　ApoE53GAG→AAGGlu→Lys日本人0.5%HC

　　13GAG→AAGGlu→Lys法籍加拿大人6HC/HTG

　　ApoE2-Dunedin228CGC→TGCArg→Cys未報(bào)道2HTG

　　ApoE2236GTG→GAGVal→Glu荷蘭人8HTG

　　ApoE7-Suita244GAG→AAGGlu→Lys日本人0.5%～0.8%HC/HTG

　　245GAG→AAGGlu→Cys

　　ApoE3112TGC→CGCCys→Arg荷蘭人3HTG

　　251CGC→GGCArg→Gly

　　ApoE1158CGC→TGCArg→Cys荷蘭人2HC

　　252CTG→GAGLeu→Glu

　　與高脂血癥無關(guān)的多態(tài)型

　　ApoE4-+-Ferburg28CTG→CCGLeu→Pro德國高加索人0.4%～0.9%N

　　112TGC→CGCCys→Arg

　　ApoE4112TGC→CGCCys→Arg荷蘭人5N

　　274CGC→CACArg→His

　　ApoE4+296AGC→CGCSer→Arg荷蘭人5N

　　ApoE584CCG→CGGPro→Arg美國白人0.2%N

　　112TGC→CGCCys→Arg

　　ApoE3-Freibaug42ACA→GCAThr→Ala德國高加索人1N

　　ApoE399GCG→ACGAla→Thr美國人1N

　　152GCC→CCCAra→Pro

　　ApoE2134CGG→CAGArg→Gln荷蘭人5N

　　1.除費(fèi)城(Philadelphia)與華盛頓(Washington)兩地名外，其他的地名均未翻譯過來;

　　2.氨基酸代號(hào)：Cys-半胱氨酸;Arg-精氨酸;Glu-谷氨酸;Lys-賴氨酸;Gly-甘氨酸;Asp-天門冬氨酸;Ser-絲氨酸;His-組氨酸;Gln-谷氨酰胺;Trp-色氨酸;Val-纈氨酸;Leu-亮氨酸;Thr-蘇氨酸;Ala-丙氨酸;Pro-脯氨酸;

　　3：分布率：加百分號(hào)的分布率是根據(jù)檢測1000人以上的結(jié)果計(jì)算的;未加百分號(hào)的數(shù)值代表測出的攜帶ApoE多態(tài)型(包括純合子與雜合子)的人數(shù);

　　4：縮寫：N(Normal,正常)HC(hypercholesterolemia,，高膽固醇血癥);FD(familialdysbetalipoproteinemia,家族性異常低密度酯蛋白血癥,，含Ⅲ型高脂蛋白血癥)。

　　(源自：Knijff et al. Hum. Mutation4:181,1994)

　　三,、Apo(a)基因的多態(tài)性

　　血漿Lp(a)的濃度與Apo(a)蛋白質(zhì)的大小成反比,，即Apo(a)的分子量愈大，則Lp(a)的濃度愈低;Apo(a)的分子量愈小,，則Lp(a)的濃度愈高,。Apo(a)的分子量在400～800KDa之間。按照Apo(a)在聚丙烯凝膠電脈時(shí)相對(duì)于ApoB100(分子量為520KDa)的遷移率,，Utermann等人于1987年將Apo(a)歸類為六種多態(tài)型;F比ApoB100遷移快;B與ApoB100遷移率相等;S1,，S2，S3,，S4比ApoB100遷移慢?，F(xiàn)已證實(shí)。Apo(a)蛋白質(zhì)的多態(tài)型是由Apo(a)基因中Kringle-4的數(shù)目變化而引起的,。Kring-4基因片段含有幾個(gè)稀少的限制性酶切部位(NotI,SfiI.KspI,Sval,KpnI),，這為加速篩選Apo(a)基因的多態(tài)性提供了幫助。表4-5列舉在奧地利北部Tyrolean區(qū)高加索人群中用KpnI作工具所測得的RFLP與1-4Kringe的數(shù)目、Apo(a)蛋白質(zhì)的大小以及血漿Lp(a)濃度的關(guān)系,。

　　表4-6 Apo(a)Kpni 片段與Apo(a)蛋白質(zhì)多態(tài)型,、Kringle-4功能區(qū)數(shù)目以及血漿Lp(a)濃度之關(guān)系

　　表現(xiàn)分子量(KDa)KpnI片段(Kb)Kringle-4數(shù)目等位基因 數(shù)目平均Lp(a)濃度(mg%)KpnI片段頻率(%)

　　F<45037-4911-131-3*<0.2

　　B～50055-6614-164-661.71.2

　　S1～55072-8217-197-934.43.8

　　S2～60088-9920-2210-1224.511.2

　　S3～650105-11623-2513-1510.213.7

　　S4>700121-21026-4216-32<5.770.1

　　*:樣本量太小,資料缺如。(源自：Utermann,G.In:The metabolic andmolecular bases of inherited disease.7th ed, Vol.Ⅱ,eds.Scriver,C.R.etal.p1897,McGraw-Hill.Inc.,New York,1995)

　　由表4-6可看出,，血漿Lp(a)的濃度亦與Kpn片段的大小成反比,。這為血漿Lp(a)與Apo(a)多態(tài)型的大小成反比從基因DNA水平提供了直接的證據(jù)。

　　Scana等人在Kringle-4第37個(gè)重復(fù)區(qū)(KIV-37,，又稱為KringleⅣ-10)檢測出了兩種突變：一種突變導(dǎo)致第72個(gè)氨基酸被精氨酸取代;另一種突變導(dǎo)致第66個(gè)氨基酸蘇氨酸被蛋氨酸取代,。前者致使其Lp(a)不能與賴氨酸結(jié)合，且血漿Lp(a)濃度降低,。后者似乎與Lp(a)濃度無關(guān),。Mooser等人報(bào)道在距第1第外顯子5’端1.3Kb區(qū)或內(nèi)，由5個(gè)核苷酸[(TTT-TA)n]構(gòu)成的VNTR與其血漿Lp(a)濃度相關(guān),。此外,。亦有報(bào)道Apo(a)基因5’端側(cè)翼區(qū)DNA序列的多態(tài)性控制血漿Lp(a)的濃度。

　　四,、ApoAⅠ基因的多態(tài)性

　　ApoAⅠ為HDL的主要結(jié)構(gòu)蛋白,。ApoAI基因突變可導(dǎo)致異常的ApoAⅠ蛋白質(zhì)的合成。有些異常的ApoAⅠ影響HDL的代謝,。已報(bào)道的阻礙ApoAⅠ合成的基因突變有重排,、缺失、無義突變等方式,。這些突變的純合子患者表現(xiàn)出極低HDL膽固醇水平和早發(fā)冠心病,。目前已發(fā)現(xiàn)至少有20種不同的ApoAI結(jié)構(gòu)基因的點(diǎn)突變導(dǎo)致氨基酸轉(zhuǎn)換(見表4-7)。其中兩種突變(精氨酸173→半胱氨酸和脯氨酸165→精氨酸)與低HDL膽固醇水平相關(guān),，但并不引致早發(fā)冠心病,。

　　Talmud等人發(fā)現(xiàn)ApoAⅠ基因啟動(dòng)子區(qū)域內(nèi)距轉(zhuǎn)錄起始部位第75個(gè)堿基(-75bp)A置換G的突變與高ApoAI及HDL水平相關(guān)。這種突變后的等位基因稱為A等位基因,，而含G的稱為G等位基因,。Saha等報(bào)道A等位基因在新加坡華人中出現(xiàn)的頻率(0.27)高于高加索人(0.12)。Wang等人發(fā)現(xiàn),，ApoAⅠ基因第1內(nèi)含子5'末端,，第83堿基C轉(zhuǎn)換成T或第84堿基G轉(zhuǎn)換成A，致使MspI酶切點(diǎn)喪失,，這種突變與高HDL膽固醇相關(guān),，比上述的-75堿基A置換G突變與高HDL膽固醇的相關(guān)還強(qiáng)。

　　表4-7　人體ApoAI基因點(diǎn)突變導(dǎo)致氨基酸改變

　　氨基酸改變1密碼子2核苷酸點(diǎn)突變

　　Pro3→ArgCCCC→G

　　Pro3→HisCCCC→A

　　Pro4→ArgCCCC→G

　　Arg10→LeuCGAG→T

　　Gly26→ArgCGGCG→C

　　Asp89→GluGATCT→G,T→A

　　Asp103→AsnCGACG→A

　　Lys107→0

　　Lys107→MetAAGA→T

　　Glu136→LysCGAGG→A

　　Glu139→GlyGAGA→G

　　Pro143→ArgCCAC→G

　　Glu147→ValGAGA→T

　　Ala158→GluGCGC→G

　　Pro165→ArgCCCC→G

　　Glu169→GlnCGAGG→C

　　Arg173→CysGCGCC→T

　　Arg177→HisCGCG→A

　　Glu198→LysCGAGG→A

　　Asp213→GlyGACA→G

　　1：氨基酸代號(hào)可參見表4-5腳注;第1排氨基酸右上角的數(shù)值表示其在ApoAⅠ一級(jí)結(jié)構(gòu)上的位置;2：加底線的核苷酸為點(diǎn)突變部位,。(源自：Eckardstein et al.J.Biol Chem.265:8612,1990)

　　五,、其他載脂蛋白基因的多態(tài)性

　　與以上介紹的ApoB,、ApoE、Apo(a)以及ApoAI的基因一樣,，其他載脂蛋白的基因也存在多態(tài)性,，以下簡要地列舉一些例子。

　　1.ApoAⅠ-CⅢ-AⅣ基因限制性片段長度多態(tài)性

　　在ApoAⅠ-CⅢ-AⅣ基因叢內(nèi),，使用XmnⅠ,、ApaⅠ、MspⅠ,、PstⅠ,、SstⅠ、XbaⅠ,、TaqⅠ和PvuⅡ限制性內(nèi)切酶已檢測出10多種RFLP,。盡管這些多態(tài)性大多由編碼氨基酸以外的DNA序列突變所致,其中有些RFLP的攜帶者與增加冠心病的危險(xiǎn)相關(guān)。比如用限制性內(nèi)切酶PstⅠ消化從人群中搜集的DNA后,。用ApoAⅠcDNA探針印跡DNA可測得3.3Kb的DNA片段(稱為P2等位基因)與2.2Kb的DNA片段(稱為P1等位基因),。P1等位基因在正常人群中出現(xiàn)率較高。P2等位基因在低HDL膽固醇患者中的出現(xiàn)率高于對(duì)照組的6倍,。來自英國與美國的報(bào)道亦證實(shí),，雜合子P1P2攜帶者血漿ApoAⅠ與HDL膽固醇的水平顯著地低于P1P2基因型攜帶者,。這提示在ApoAⅠ-CⅢ-AⅣ基因叢中,，PstⅠ酶切點(diǎn)的多態(tài)性，P2等位基因,，與降低血漿ApoAⅠ和HDL的水平以及誘發(fā)冠心病有關(guān),。最近，Dallinga-Thie等人在美國脂類研究雜志上報(bào)道,，用限制性內(nèi)切酶XmnⅠ與MspⅠ在ApoAⅠ-CⅢ-AⅣ基因叢內(nèi)檢測出的稀有等位基因與高血漿膽固醇,、甘油三酯、ApoB以及LDL膽固醇水平相連,。這些結(jié)果顯示,，ApoAⅠ-CⅢ-AⅣ基因叢參與調(diào)節(jié)血漿膽固醇及甘油三酯的代謝。

　　2.ApoEⅠ-CⅠ-CⅡ基因限制性片段長度多態(tài)性

　　位于第19對(duì)染色體上的ApoEⅠ-CⅠ-CⅡ基因叢也有多態(tài)性的存在,。檢測出其RFLP的限制性內(nèi)切酶包括：HpaⅠ,、TaqⅠ、BglⅡ,、DraⅠ,、NcoⅠ以及BglⅡ。Klasen等人報(bào)道,，HpaⅠ限制性片段長度的多態(tài)性與易發(fā)Ⅲ型高脂血癥有關(guān),。然而HpaⅠ限制性片段長度的多態(tài)性與E2/E2基因型無關(guān)接關(guān)聯(lián),。這說明HpaⅠ的RFLP是不同于ApoE基因的一種獨(dú)立的遺傳因子，其突變點(diǎn)尚未闡明,。

　　3.ApoAⅡ基因的突變

　　Deeb等報(bào)道了在一對(duì)日本姐妹中檢測出的家族性ApoAⅡ缺陷癥,。冠狀動(dòng)脈造影顯示這對(duì)姐妹未患血管疾病。盡管免疫生化檢驗(yàn)測不出血漿ApoAⅡ水平,，患者HDL膽固醇在正常范圍,。DNA分析顯示，患者ApoAⅡ基因內(nèi)第3內(nèi)含子剪接供體部位的第一個(gè)堿基G突變成為A,，從而阻礙了內(nèi)含子從初級(jí)轉(zhuǎn)錄物中剪除掉的過程,。這無疑是導(dǎo)致ApoAⅡ缺陷的原因。

　　4.ApoAⅣ基因的多態(tài)性

　　常見的ApoAⅣ等位基因編碼ApoAⅣ的第360與347個(gè)氨基酸,，分別為谷氨酰胺和蘇氨酸,。當(dāng)ApoAⅣ基因的第360密碼子上第3個(gè)堿基T置換G后，正常的第360氨基酸位置上的谷氨酰胺被代之為組氨酸,，當(dāng)?shù)?47密碼子上第1個(gè)堿基T置換A后,，蘇氨酸347→絲氨酸的變異即發(fā)生。關(guān)于這兩種ApoAⅣ基因多態(tài)性對(duì)脂類代謝的影響尚無一致的結(jié)論,。另一種突變,，即密碼子127的突變可致HincⅡ酶切位點(diǎn)的喪失。最近Kamboh等人對(duì)西伯利亞中部的馴鹿牧民檢測中發(fā)現(xiàn),，沒有HincⅡ酶切位點(diǎn)等位基因的攜帶者血漿甘油三酯水平高于HincⅡ酶切位點(diǎn)等位基因的攜帶者,。

　　5.ApoCⅡ基因的多態(tài)性

　　載脂蛋白CⅡ基因的突變有四種類型被鑒定：a.無義突變;b.起動(dòng)密碼子的堿基突變;c.第2內(nèi)含子剪切供體部位突變;d.由堿基插入或缺失所致的移碼突變。這些突變患者的血漿ApoCⅡ水平顯著降低或缺失,。其遺傳方式為常染色體隱性遺傳,。

　　6.ApoCⅢ基因的多態(tài)性

　　已發(fā)現(xiàn)有三種ApoCⅢ基因多態(tài)性與高甘油三酯血癥有關(guān)：a.3175核苷酸C顛換成G;b.3206核苷酸T顛換成G;c.3206G等位基因。Li等人不久前在臨床研究雜志上報(bào)道,，ApoCⅢ基因啟動(dòng)子內(nèi)-482與-455堿基的突變與發(fā)生高甘油三酯血癥有關(guān),。作者推測這種突變正發(fā)生在受胰島素抑制DNA序列范圍內(nèi)。突變后的ApoCⅢ基因啟動(dòng)子擺脫了胰島素的抑制調(diào)控,，ApoCⅢ的轉(zhuǎn)錄大大加強(qiáng),，ApoCⅢ的合成增加。這可能是人群中發(fā)生高甘油三酯的一個(gè)主要因素,。

　　7.ApoD基因的多態(tài)性

　　Vijayaraghavan等人檢測了57個(gè)肥胖病人57名對(duì)照者ApoD基因TaqⅠ酶切位點(diǎn)限制性片段長度多態(tài)性：2.2與2.7Kb等位基因,。他們發(fā)現(xiàn)2.2Kb等位基因在肥胖者中的分布顯著地高于正常者。這包括含有2.2Kb等位基因的雜合子與純合子,，提示顯性遺傳方式,。作者認(rèn)為，ApoD基因TaqⅠ限制性片段長度多態(tài)性可作為研究肥胖病的一個(gè)遺傳標(biāo)志,。

　　8.ApoH基因的多態(tài)性

　　ApoH基因第247密碼子突變,，致使第247個(gè)氨基酸纈氨酸被亮氨酸取代,。因?yàn)榇送蛔兪筊asⅠ酶切位點(diǎn)喪失，故這種限制性片段長度多態(tài)性很易檢測,。最近Kamboh等調(diào)查西伯利亞中部馴鹿牧民中三種ApoH等位基因ApoH1,、ApoH2、與ApoH3的分布與血漿脂質(zhì)水平的關(guān)系,，他們發(fā)現(xiàn)ApoH等位基因與男子低甘油三酯水平相關(guān),。而與女子高甘油三酯水平相關(guān)。而女子高甘油三酯水平相關(guān),。ApoH基因的多態(tài)性與脂質(zhì)代謝的關(guān)系還有待于更廣泛地,、更深入地探討。

　　9.ApoJ基因的多態(tài)性

　　Kamboh暨同事報(bào)道,，在對(duì)美國白種人,、黑人、美洲印第安人,、愛斯基摩人,、新幾內(nèi)亞人及尼日利亞人6個(gè)民族共985名受試者的檢測中。他們發(fā)現(xiàn)了ApoJ有三種多態(tài)型,，即ApoJ1,、ApoJ2和ApoJ3。ApoJ1存在于所有受試者基因內(nèi),。ApoJ2僅存于美國黑人與尼日利亞人黑人,，出現(xiàn)頻率分別為24%與28%。ApoJ3僅從一美國黑人受試者測出,。造成此多態(tài)性的突變尚未見報(bào)道,。這三種“等位基因”似乎對(duì)總膽固醇,、LDL膽固醇,、HDL膽固醇、VLDL膽固醇,、甘油三酯的水平?jīng)]有顯著的影響,。

　　結(jié)論

　　隨著分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用于脂類代謝與動(dòng)脈粥樣硬化的研究領(lǐng)域，幾乎所有被命名的載脂蛋白的cDNA與基因被分離與鑒定,。有關(guān)載脂蛋白基因多態(tài)性的報(bào)道與日俱增,。人們對(duì)脂蛋白代謝紊亂從分子缺陷的水平進(jìn)行認(rèn)識(shí)取得了長足的進(jìn)展。然而,，各種載脂蛋白的生理功用尚未完全闡明,。近年來發(fā)現(xiàn)ApoE4與老年性癡呆有關(guān)，揭示了ApoE的新的功用就佐證了這一點(diǎn),。對(duì)各種載脂蛋白的基因的各種多態(tài)性在所有種族間的分布進(jìn)行系統(tǒng)的檢測與分析還有待于進(jìn)一步努力,。一些新的,、簡易的、準(zhǔn)確的檢測方法也有待于開發(fā),。這些研究可望為載脂蛋白與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制的探討以及對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化與冠心病的防治尋求新的措施開拓新的前景,。

　　(葉永清)