一,、原理

　　定量的抗原加入到含有一定量的相應(yīng)抗體的瓊脂糖凝膠中,，在電場作用下，引起抗原抗體的遷移和相互反應(yīng),，當(dāng)比例合適時(shí)形成肉眼可見的沉淀峰,，由于電泳繼續(xù)進(jìn)行，樣品孔不斷有抗原移向抗原抗體復(fù)合物的沉淀峰,，因抗原過剩使沉淀溶解而在前面又形成新的抗原抗體復(fù)合物的沉淀峰,。如此反復(fù)向前，直到再無游離抗原而反應(yīng)終止,，形成上行火箭狀的沉淀峰,，其沉淀峰高度和抗原的濃度成正比，與同樣條件下的已知濃度的抗原血清比較,，即可求得待測血清的抗原含量,。

　　二、試劑(以ApoB為例)

　　1.瓊脂糖,。

　　2.巴比妥鈉緩沖液(μ=0.05,，pH=8.6):巴比妥鈉10.30g，巴比妥1.84g,、甘氨荎1.0g,、PEg 60004g，加900ml水加溫助溶,，待冷,，加1mol/L調(diào)pH至8.6，混勻,，轉(zhuǎn)入1000ml容量瓶內(nèi),，再加水到刻度，測試pH后裝瓶待用,。

　　3.羊抗人ApoB血清(效價(jià)1：128以上)

　　4.ApoB標(biāo)準(zhǔn)血清,。

　　5.固定液：1%鞣酸或10%三氯醋酸。

　　6.氨基黑10B染色液：氨基黑10B0.1g,，溶于100ml甲醇-醋-水溶液(7：1：2),。

　　三、操作

　　1.用巴比妥鈉緩沖液配制1.5%瓊脂糖液,，在水浴煮溶,，置56℃水箱備用。

　　2.取巴比妥鈉緩沖液3.36ml入小三角燒瓶內(nèi),，再加抗人ApoB抗血清0.04ml,，充分混和，預(yù)溫至56℃,。

　　3.在預(yù)溫至56℃的3.4ml抗血清緩沖液內(nèi),，加入1.5%瓊脂糖3.5ml,，混勻，立即倒入預(yù)封好的有機(jī)玻璃架內(nèi),，待凝。

　　4.用打孔器按圖打孔,，孔徑3mm,。孔距3mm,。

　　5.置凝膠板于水平電泳槽內(nèi),，兩極用三層濾紙搭橋，抗原一端接陰極,，另一端接陽極,。

　　6.以電壓12V/cm通電，用微量進(jìn)樣器準(zhǔn)確加入等測血清5μl(1：20或1：30稀釋),。

　　電泳2～3h后,，關(guān)閉電源，置凝膠板于10.0%三氯醋酸液固定15～20min,，取出膠板,，在黑色背景燈光下量取沉淀峰高度，如圖18-3所示,。

　　圖18-3 免疫火箭瓊脂糖電泳圖

　　7.計(jì)算

　　(1)查標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

　　(2)按下式計(jì)算：